Banca de QUALIFICAÇÃO: KELEN REGINA ASCOLI BALDI

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : KELEN REGINA ASCOLI BALDI
DATA : 13/12/2019
HORA: 13:00
LOCAL: IFC Campus Concórdia
TÍTULO:

PADRONIZAÇÃO DA  IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA E OTIMIZAÇÃO DA  IMUNOHISTOQUÍMICA PARA DIAGNÓSTICO DE Listeria monocytogenes EM TECIDOS PARAFINIZADOS.

PALAVRAS-CHAVES:

Listeriose; técnicas imunológicas; tecidos fixados

PÁGINAS: 45
RESUMO:

Listeria monocytogenes é uma bactéria que pode infectar humanos e animais, podendo causar encefalite, septicemia e abortos. Os animais mais acometidos pela doença são os ovinos, caprinos e bovinos. Além de ser uma zoonose, a listeriose causa perdas econômicas pela morte ou sacrifício de animais, gasto com medicamentos e diminuição da produção. Por ser de difícil isolamento,  se faz necessário a implantação de técnicas imunológicas que auxiliem no diagnóstico definitivo da listeriose, como a imunofluorescência e imunohistoquímica. Estas técnicas ainda permitem o diagnóstico etiológico e estudos retrospectivos em tecidos já fixados em formalina e embebidos em parafina. O objetivo deste trabalho foi padronizar a técnica de imunofluorescência direta e otimizar a técnica de imunohistoquímica para Listeria monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados. Foram selecionados blocos de tecidos de animais com histórico e/ou lesões compatíveis com listeriose, que foram processados pelo laboratório de Patologia Veterinária no Instituto Federal Catarinense, Campus Concórdia, SC.  Para a padronização das técnicas, amostras positivas e negativas para L. monocytogenes foram selecionadas através da técnica de PCR (reação da polimerase em cadeia) convencional, para serem usadas como controle. Para ambas as técnicas, secções de tecidos foram cortados por microtomia e transferidas para lâminas de carga. Para a imunohistoquímica, foi utilizado anticorpo primário anti L. monocytogenes policlonal (BD, EUA) diluido a 1:200, seguido de anticorpo secundário acoplado a polímero (Kit Polímero (Dako, EUA), revelação com 3-Amino-9-etilcarbazol (AEC, Dako, EUA) e leitura em microscópio óptico. Para a imunofluorescência, foi utilizado mesmo anticorpo primário, seguido de anticorpo secundário anti-IgG de coelho marcado com fluoresceína (Abcam, EUA), montagem de lamínula com glicerol e leitura em microscópio de fluorescência com filtro de excitação EX 475/AF40 e de emissão EM 535/AF45. Cada amostra foi classificada quanto à presença ou ausência de imunomarcação. Houve forte marcação imunológica  tanto na técnica de imunohistoquímica quanto na imunofluorescência em amostras de bovino experimentalmente infectado com L. monocytogenes ATCC 7644, e em amostras de tecido nervoso de ruminantes naturalmente infectados. O estudo demonstrou que as duas técnicas foram eficientes para detectar o patógeno em tecidos parafinizados, com marcações imunológicas nos mesmos locais do tecido. A realização de imunofluorescência em tecido emblocado em parafina ao invés de tecido fresco é algo  inovador, uma vez que existem poucos relatos utilizando esta técnica em  materiais biológicos processados. Porém, a imunofluorescência não apresentou diferença de sensilibidade ao comparar com a imunohistoquímica, sendo esta última uma técnica de menor custo e maior facilidade na interpretação dos resultados. O diagnóstico eficiente de Listeria sp. é muito relevante para a saúde pública; controlando a ocorrência no rebanho, evita-se que este patógeno chegue ao ser humano e também diminua a perda econômica pela morte de animais. A possibilidade de diagnóstico utilizando tecidos já fixados minimiza o risco de contaminação na manipulação das amostras no laboratório que permite, assim, um diagnóstico sensível e definitivo, mesmo na falta de tecido fresco para isolamento microbiológico.


    

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1081425 - TEANE MILAGRES AUGUSTO GOMES
Interna - 2408296 - SORAYA REGINA SACCO
Interno - 2017813 - RICARDO EVANDRO MENDES
Interna - 1989957 - ALESSANDRA FARIAS MILLEZI